Gelelektrofores är en av de viktigaste metoderna som används inom molekylärbiologi för analys av DNA.Denna metod involverar migrering av fragment av DNA genom en gel, där de separeras baserat på storlek eller form.Men har du någonsin stött på några fel under dina elektroforesexperiment, som utsmetade band på agarosgelen, eller inga band på gelén?Vad kan vara orsaken till dessa fel?
Våra tekniker har sammanfattat ett par felsökningar här för din referens.
1. Smörjde band på agarosgel
●DNA:t bröts ned.Undvik nukleaskontamination.
● Elektroforesbufferten är inte färsk.Efter upprepad användning av elektroforesbuffert minskar jonstyrkan, och dess pH-värde ökar, så buffertkapaciteten försvagas, vilket påverkar elektroforeseffekten.Det rekommenderas att byta ut elektroforesbufferten ofta.
● Felaktiga elektroforesförhållanden användes.Låt inte spänningen överstiga 20 V/cm och håll en temperatur <30°C under elektrofores.För gigantisk DNA-strängelektrofores bör temperaturen vara <15°C. Kontrollera att elektroforesbufferten har tillräckligt med buffertkapacitet.
● För mycket DNA laddades på gelén.Minska mängden DNA.
● För mycket salt i DNA:t.Använd etanolfällning för att ta bort överskott av salter i avancerad.
● DNA:t var kontaminerat med protein.Använd fenolextraktioner för att ta bort protein på avancerad nivå.
● DNA:t denaturerades.Värm inte före elektrofores.Späd DNA i buffert med 20 mM NaCl.
2. Anomalier DNA-bandmigrering
● Renaturering av COS-stället för λHind III-fragmentet.Värm DNA i 5 minuter under 65 ° C före elektrofores och kyl sedan det på isenhet i 5 minuter.
● Felaktiga elektroforesförhållanden användes.Låt inte spänningen överstiga 20 V/cm och håll en temperatur <30°C under elektrofores.Kontrollera att elektroforesbufferten har tillräckligt med buffertkapacitet.
● DNA:t denaturerades.Värm inte före elektrofores.Späd DNA i buffert med 20 mM NaCl.
3. Svaga eller inga DNA-band på agarosgel
● Det fanns otillräcklig mängd eller koncentration av DNA laddat på gelén.Öka mängden DNA.Polyakrylamidgelelektrofores är något känsligare än agaroselektrofores, och provbelastningen kan reduceras på lämpligt sätt.
● DNA:t bröts ned.Undvik nukleaskontamination.
● DNA:t underkastades elektrofores från gelén.Elektroforisera gelen under kortare tid, använd en lägre spänning eller använd en högre procent gel.
● Felaktig W-ljuskälla användes för visualisering av etidiumbromid-färgat DNA.Använd ett W-ljus med kort våglängd (254 nm) för större känslighet.
4. DNA-band saknas
●Det lilla DNA:t underkastades elektrofores från gelén.Elektroforisera gelen under kortare tid, använd en lägre spänning eller använd en högre procent gel.
● Svårt att särskilja DNA-banden hos liknande molekyler.Öka elektroforestiden och kontrollera koncentrationenav gelén för att säkerställa att korrekt procentandel gel som ska användas.
● DNA:t denaturerades.Värm inte före elektrofores.Späd DNA i buffert med 20 mM NaCl.
● DNA-strängarna är enorma, och konventionell gelelektrofores är inte lämplig.Analysera på pulsgelelektrofores.Vilka andra problem har du haft med agarosgelelektrofores?Vi kommer att forska mer för guider i framtiden.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) är ett specialiserat företag som fokuserar på elektroforesrelaterade produkter i Kina.Dess historia börjar 1970 när Kina ännu inte hade gått in i reformen och öppnandet.Genom år av utveckling har Liuyi Bitotech sitt eget varumärke, som är känt som Liuyi Brand på den inhemska marknaden för elektroforesprodukter.
Varumärket Liuyi har mer än en 50-årig historia i Kina och företaget kan tillhandahålla stabila och högkvalitativa produkter över hela världen.Genom år av utveckling är det värt ditt val!
De horisontella elektroforescellerna (tankar/kammare) av Liuyi Biotech är av hög kvalitet med bra utseende.Med olika storlekar av gelbrickor kan de uppfylla dina olika experimentella krav.Vi har vårt eget tekniska team och fabrik.Från design till tillverkning, råvarorna till nyckeldelarna, vi kan kontrollera hela processen.DYCP 31-serien är för DNA-elektrofores, som är modellDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, ochDYCP-31E.Skillnaderna mellan dem är gelstorlekar och pris.Vi tillhandahåller produkter i full storlek till våra kunder.ModellenDYCP-32Ckan göra den största gelén 250mm*250mm.
Under tiden rekommenderar vi vår elektroforesströmförsörjningDYY-6C,DYY-6DochDYY-10Cför våra elektroforesceller (tankar/kammare) DYCP-31 och 32-serien.
Om du vill ha mer information om produkterna, vänligen besök denna webbplats för att få mer, och välkommen att kontakta oss via e-post för att meddela oss vad du vill ha, och se om vi kan tillhandahålla lösningarna för dig.
För mer information om oss, vänligen kontakta oss via e-post[e-postskyddad], [e-postskyddad].
Posttid: maj-09-2022