Vad är polyakrylamidgelelektrofores?

Polyakrylamidgelelektrofores

Gelelektrofores är en grundläggande teknik i laboratorier över de biologiska disciplinerna, som tillåter separation av makromolekyler som DNA, RNA och proteiner. Olika separationsmedia och mekanismer gör att undergrupper av dessa molekyler kan separeras mer effektivt genom att utnyttja deras fysiska egenskaper. För proteiner i synnerhet är polyakrylamidgelelektrofores (PAGE) ofta den valda tekniken.

PAGE är en teknik som separerar makromolekyler såsom proteiner baserat på deras elektroforetiska rörlighet, det vill säga analyternas förmåga att röra sig mot en elektrod med motsatt laddning. I PAGE bestäms detta av laddningen, storleken (molekylvikten) och formen på molekylen. Analyter rör sig genom porer som bildas i polyakrylamidgel. Till skillnad från DNA och RNA varierar proteinernas laddning beroende på vilka aminosyror som ingår, vilket kan påverka hur de fungerar. Aminosyrasträngar kan också bilda sekundära strukturer som påverkar deras skenbara storlek och följaktligen hur de kan röra sig genom porerna. Det kan därför ibland vara önskvärt att denaturera proteiner före elektrofores för att linjärisera dem om en mer exakt uppskattning av storlek krävs.

SDS-SIDA

Natrium-dodecylsulfat polyakrylamidgelelektrofores är en teknik som används för att separera proteinmolekyler med massor av 5 till 250 kDa. Proteinerna separeras enbart på basis av deras molekylvikt. Natriumdodecylsulfat, ett anjoniskt ytaktivt ämne, tillsätts vid framställningen av geler som maskerar proteinprovernas inneboende laddningar och ger dem ett liknande förhållande mellan laddning och massa. Med enkla ord denaturerar det proteinerna och ger dem en negativ laddning.

Native PAGE

Native PAGE är en teknik som använder icke-denaturerade geler för separation av proteiner. Till skillnad från SDS PAGE tillsätts inget denaturerande medel vid framställningen av geler. Som ett resultat sker separationen av proteiner på basis av proteinernas laddning och storlek. I denna teknik är konformationen, veckningen och aminosyrakedjorna hos proteinerna de faktorer som separationen är beroende av. Proteinerna skadas inte i denna process och kan återvinnas efter avslutad separation.

Hur fungerar polyakrylamidgelelektrofores (PAGE)?

Grundprincipen för PAGE är att separera analyter genom att passera dem genom porerna på en polyakrylamidgel med hjälp av en elektrisk ström. För att uppnå detta polymeriseras en akrylamid–bisakrylamidblandning (polyakrylamid) genom tillsats av ammoniumpersulfat (APS). Reaktionen, som katalyseras av tetrametyletylendiamin (TEMED), bildar en nätliknande struktur med porer genom vilka analyter kan röra sig (Figur 2). Ju högre procentandel av total akrylamid som ingår i gelén, desto mindre porstorlek, desto mindre proteiner som kommer att kunna passera igenom. Förhållandet mellan akrylamid och bisakrylamid påverkar också porstorleken men detta hålls ofta konstant. Mindre porstorlekar minskar också hastigheten med vilken små proteiner kan röra sig genom gelén, vilket förbättrar deras upplösning och förhindrar att de rinner av i bufferten snabbt när ström appliceras.

Utrustning för polyakrylamidgelelektrofores

Gelelektroforescell (tank/kammare)
Geltanken för polyakrylamidgelelektrofores (PAGE) skiljer sig från agarosgeltanken. Agarosgeltanken är horisontell, medan PAGE-tanken är vertikal. Med vertikal elektroforescell (tank/kammare) hälls en tunn gel (normalt 1,0 mm eller 1,5 mm) mellan två glasplattor och monteras så att botten av gelén är nedsänkt i buffert i en kammare och toppen är nedsänkt i buffert i en annan kammare. När ström appliceras migrerar en liten mängd buffert genom gelén från den övre kammaren till den nedre kammaren. Med starka klämmor för att garantera att monteringen håller sig i upprätt läge, underlättar utrustningen snabba gelkörningar med jämn kylning vilket resulterar i distinkta band.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) tillverkar en mängd olika storlekar av polyakrylamidgelelektroforesceller (tankar/kammare). Modellerna DYCZ-20C och DYCZ-20G är vertikala elektroforesceller (tankar/kammare) för DNA-sekvensanalys. Några av de vertikala elektroforescellerna (tankar/kammare) är kompatibla med blottingsystem, som modellen DYCZ-24DN, DYCZ-25D och DYCZ-25E är kompatibla med Western Blotting-system modell DYCZ-40D, DYCZ-40G och DYCZ-40F, som används för att överföra proteinmolekylen från gelén till membranet. Efter SDS-PAGE-elektrofores är Western Blotting en teknik för att detektera ett specifikt protein i en proteinblandning. Du kan välja dessa blottingsystem enligt de experimentella kraven.

Elektrofores strömförsörjning
För att ge elektriciteten för att köra gelen behöver du en elektroforesströmförsörjning. På Liuyi Biotechnology tillhandahåller vi en rad elektroforesströmförsörjningar för alla applikationer. Modellerna DYY-12 och DYY-12C med hög stabil spänning och ström kan uppfylla högspänningskrav elektrofores. Den har funktionen av stativ, timing, VH och steg-för-steg-applikation. De är idealiska för tillämpning av IEF och DNA-sekvensering av elektrofores. För allmän användning av protein- och DNA-elektrofores har vi modellen DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, och så vidare, som också är heta försäljningsströmförsörjningar med elektroforesceller (tankar/kammare). Dessa kan användas för mellan- och lågspänningselektroforesapplikationer, såsom för skollabb, sjukhuslabb och så vidare. Fler modeller för strömförsörjning, besök vår hemsida.

Varumärket Liuyi har mer än en 50-årig historia i Kina och företaget kan tillhandahålla stabila och högkvalitativa produkter över hela världen. Genom år av utveckling är den värd ditt val!

För mer information om oss, vänligen kontakta oss via e-post[e-postskyddad] or [e-postskyddad].

Referenser till Vad är polyakrylamidgelelektrofores?
1. Karen Steward PhD polyakrylamidgelelektrofores, hur det fungerar, teknikvarianter och dess tillämpningar