Vi delade flera överväganden förra veckan för att använda cellulosaacetatmembranelektrofores, och vi kommer att avsluta detta ämne här idag för din referens.
Urval av Buffertkoncentration
Buffertkoncentrationen som används vid cellulosaacetatmembranelektrofores är i allmänhet lägre än den som används vid papperselektrofores. Det vanliga pH 8,6Barbitalbuffert väljs typiskt inom intervallet 0,05 mol/L till 0,09 mol/L. Vid val av koncentration görs en preliminär bestämning. Till exempel, om längden på membranremsan mellan elektroderna i elektroforeskammaren är 8-10 cm, krävs en spänning på 25V per centimeter membranlängd, och strömintensiteten bör vara 0,4-0,5 mA per centimeter membranbredd. Om dessa värden inte uppnås eller överskrids under elektrofores, bör buffertkoncentrationen ökas eller spädas ut.
En alltför låg buffertkoncentration kommer att resultera i en snabb rörelse av banden och en ökning av bandbredden. Å andra sidan kommer en alltför hög buffertkoncentration att bromsa bandmigreringen, vilket gör det svårt att urskilja vissa separationsband.
Det bör noteras att vid cellulosaacetatmembranelektrofores leds en betydande del av strömmen genom provet, vilket genererar en avsevärd mängd värme. Ibland kan den valda buffertkoncentrationen anses lämplig. Men under förhållanden med ökad omgivningstemperatur eller vid användning av högre spänning kan förångningen av vatten på grund av värmen intensifieras, vilket resulterar i en alltför hög buffertkoncentration och till och med få membranet att torka ut.
Provvolym
Vid cellulosaacetatmembranelektrofores bestäms mängden provvolym av olika faktorer, inklusive elektroforesförhållanden, egenskaper hos själva provet, färgningsmetoder och detektionstekniker. Som en allmän princip gäller att ju känsligare detektionsmetoden är, desto mindre kan provvolymen vara, vilket är fördelaktigt för separation. Om provvolymen är för stor kan det hända att de elektroforetiska separationsmönstren inte är tydliga, och färgning kan också vara tidskrävande. Men när man kvantitativt analyserar de separerade färgade banden med elueringskolorimetriska detektionsmetoder, bör provvolymen inte vara för liten, eftersom det kan resultera i lägre absorbansvärden för vissa komponenter, vilket leder till högre fel vid beräkning av deras innehåll. I sådana fall bör provvolymen ökas på lämpligt sätt.
Vanligtvis sträcker sig provvolymen som tillsätts på varje centimeter av provappliceringslinjen från 0,1 till 5 μL, vilket motsvarar en provmängd på 5 till 1000 μg. Till exempel, vid rutinanalys av serumproteinelektrofores överstiger den provvolym som tillsätts på varje centimeter av appliceringslinjen i allmänhet inte 1 μL, vilket motsvarar 60 till 80 μg protein. Men när man analyserar lipoproteiner eller glykoproteiner med samma elektroforesmetod måste provvolymen ökas i motsvarande grad.
Sammanfattningsvis bör den mest lämpliga provvolymen väljas baserat på specifika förhållanden genom en serie preliminära experiment.
Val av färgningslösning
De separerade banden i cellulosaacetatmembranelektrofores färgas vanligtvis före detektion. Olika provkomponenter kräver olika färgningsmetoder, och färgningsmetoderna som är lämpliga för cellulosaacetatmembranelektrofores kanske inte är helt tillämpliga på filterpapper.
Det finns tre huvudprinciper att välja färgningslösning förcellulosaacetatmembran. För det första,Vattenlösliga färgämnen bör föredras framför alkohollösliga färgämnen för att undvika membrankrympning och deformation orsakad av den senares färgningslösning. Efter färgning är det viktigt att skölja membranet med vatten och minimera färgningstiden. Annars kan membranet bli böjt eller krympt, vilket skulle påverka efterföljande upptäckt.
För det andra är det att föredra att välja färgämnen med stark färgningsaffinitet för provet. Vid cellulosaacetatmembranelektrofores av serumproteiner används aminosvart 10B vanligen på grund av dess starka färgningsaffinitet för olika serumproteinkomponenter och dess stabilitet.
För det tredje bör pålitliga kvalitetsfärgämnen väljas. Vissa färgämnen kan, trots att de har samma namn, innehålla föroreningar som resulterar i en särskilt mörk bakgrund efter färgning. Detta kan till och med göra de ursprungligen väl åtskilda banden suddiga, vilket gör dem svåra att urskilja.
Slutligen är valet av färglösningskoncentration viktigt. Teoretiskt kan det tyckas att en högre koncentration av färgningslösning skulle leda till mer grundlig färgning av provkomponenter och bättre färgningsresultat. Så är dock inte fallet. Bindningsaffiniteten mellan provkomponenterna och färgämnet har en viss gräns, som inte ökar med ökningen av färgningslösningskoncentrationen. Tvärtom, en alltför hög koncentration av färgningslösning slösar inte bara färgen utan gör det också svårt att uppnå en tydlig bakgrund. Dessutom, när färgintensiteten når ett visst maximalt värde, följer färgämnets absorbanskurva inte ett linjärt samband, särskilt vid kvantitativa mätningar. Vid cellulosaacetatmembranelektrofores är färgningslösningskoncentrationen i allmänhet lägre än den som används vid papperselektrofores.
Detaljer att veta om Beijing Liuyi Biotechnology's cellulosaacetatmembranelektroforestank och dess elektroforesapplikation, besök här:
lExperiment för att separera serumprotein med cellulosaacetatmembran
lCellulosaacetatmembranelektrofores
lFlera överväganden bör man tänka på när man använder cellulosaacetatmembranelektrofores (1)
Om du har någon inköpsplan för våra produkter, tveka inte att kontakta oss. Du kan skicka ett meddelande till oss på e-post[e-postskyddad]eller[e-postskyddad], eller ring oss på +86 15810650221 eller lägg till Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Hänvisning:Electrophoresis (andra upplagan) av Mr. Li
Posttid: 2023-06-06