Introduktion
Gelelektrofores är en grundläggande teknik inom molekylärbiologi, som ofta används för separation av proteiner, nukleinsyror och andra makromolekyler. Korrekt kontroll av provvolym, spänning och elektroforestid är avgörande för att uppnå exakta och reproducerbara resultat.Vår labbkollega erbjuderbästa praxis för att hantera dessa parametrar under SDS-PAGE gelelektrofores.
Beijing Liuyi Bioteknologi gelelektrofores produkter
Provvolym: Säkerställer konsistens
När du utför SDS-PAGE-elektrofores är provvolymen en nyckelfaktor som avsevärt kan påverka upplösningen av dina resultat. Det rekommenderas generellt att ladda 10 µL totalt protein per brunn. För att säkerställa konsistens och förhindra provdiffusion mellan intilliggande brunnar är det viktigt att ladda en lika stor volym av 1x laddningsbuffert i alla tomma brunnar. Denna försiktighetsåtgärd hjälper till att förhindra spridning av prover till närliggande körfält, vilket kan inträffa om brunnen lämnas tom.
Innan du laddar dina prover, börja alltid med att lägga till en molekylviktsmarkör till en brunn. Detta möjliggör enkel identifiering av proteinstorlekar efter elektrofores.
Spänningskontroll: Balanserande hastighet och upplösning
Spänningen som appliceras under elektrofores påverkar direkt både hastigheten med vilken proverna migrerar genom gelén och upplösningen av separationen. För SDS-PAGE är det lämpligt att börja med en låg spänning på runt 80V. Denna initiala lågspänning tillåter proverna att migrera långsamt och jämnt, koncentrera dem i ett skarpt band när de kommer in i den separerande gelén.
När proverna har kommit helt in i separeringsgelen kan spänningen ökas till 120V. Denna högre spänning påskyndar migrationen, vilket säkerställer att proteinerna separeras effektivt efter deras molekylvikt. Det är viktigt att övervaka utvecklingen av bromfenolblå färgämnesfronten, vilket indikerar fullbordandet av elektroforesen. För geler med en koncentration av 10-12% är 80-90 minuter vanligtvis tillräckligt; men för 15 % geler kan du behöva förlänga körtiden något.
Time Management: Att veta när man ska sluta
Timing är en annan kritisk faktor vid gelelektrofores. Att köra gelen under för lång eller för kort period kan leda till suboptimal separation. Migrationen av bromfenolblått färgämne är en användbar indikator: när den når botten av gelén är det vanligtvis dags att stoppa körningen. För standardgeler, såsom 10-12 %, är en elektroforesvaraktighet på cirka 80-90 minuter typiskt tillräcklig. För högre andel geler, som 15 %, bör körtiden förlängas för att säkerställa fullständig separation av proteiner.
Bufferthantering: Återanvändning och förberedelse av buffertar
Elektroforesbuffert kan återanvändas 1-2 gånger, beroende på ditt laboratoriums specifika förhållanden. För optimalt resultat rekommenderas det dock att förbereda färsk 10x buffert och späda den strax före användning. Detta säkerställer att bufferten bibehåller sin effektivitet, vilket leder till mer tillförlitliga elektroforesresultat.
Beijing Liuyi Bioteknologi gelelektrofores produkter
Genom att noggrant kontrollera provvolymen, spänningen och elektroforestiden kan du förbättra noggrannheten och reproducerbarheten av dina gelelektroforesresultat avsevärt. Att implementera dessa bästa praxis i ditt laboratoriearbete kommer att hjälpa dig att uppnå tydligare och mer distinkta band, vilket leder till bättre data för nedströmsanalys.
Om du har fler bra metoder för att optimera gelelektroforesexperiment, välkommen att diskutera med oss!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiserat sig på tillverkning av elektroforesinstrument i mer än 50 år med vårt eget professionella tekniska team och FoU-center. Vi har en pålitlig och komplett produktionslinje från design till besiktning och lager, samt marknadsföringsstöd. Våra huvudprodukter är elektroforescell (tank/kammare), elektrofores strömförsörjning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbild- och analyssystem etc. Vi levererar även labbinstrument som PCR-instrument, virvelblandare och centrifug för laboratoriet.
Om du har någon inköpsplan för våra produkter, tveka inte att kontakta oss. Du kan skicka ett meddelande till oss på e-post[e-postskyddad]eller[e-postskyddad], eller ring oss på +86 15810650221 eller lägg till Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Skanna QR-koden för att lägga till på Whatsapp eller WeChat.
Posttid: 2024-august