Princip
Cellulosaacetatfilmelektrofores är en elektroforesmetod som använder en cellulosaacetatfilm som stöd. Fenomenet där laddade partiklar rör sig mot den motsatta elektroden under inverkan av ett elektriskt fält kallas elektrofores. Eftersom varje protein har en specifik isoelektrisk punkt, om ett protein placeras i en lösning med ett pH lägre än dess isoelektriska punkt, kommer proteinet att vara positivt laddat och röra sig mot den negativa elektroden. Tvärtom flyttar den till den positiva polen. Eftersom hastigheten hos proteinmolekyler som rör sig i ett elektriskt fält är relaterad till deras laddning, formen och storleken på molekylerna, kan olika proteiner separeras genom elektrofores. Serum innehåller en mängd olika proteiner, som alla har isoelektriska punkter vid pH 7,5 eller lägre. När serum placeras i pH 8,6 buffert för att köra elektrofores, är alla serumproteiner negativt laddade och kommer att röra sig mot den positiva sidan i det elektriska fältet. Eftersom olika serumproteiner har olika laddningar vid samma pH, är de molekylära partiklarna olika i storlek, och därför är migrationshastigheten olika, och de separeras genom elektrofores. De isoelektriska punkterna och molekylvikterna för serumproteiner visas i tabellen nedan:
| Protein | Isoelektriska punkter (PI) | Molekylvikt |
| Albumin | 4,88 | 69 000 |
| al-gloulin | 5.00 | 200 000 |
| a2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| p-gloulin | 5.12 | 9 000~150 000 |
| y-gloulin | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
Experimentet går ut på att separera olika proteiner i blodserum med cellulosaacetatmembran (förkortning CAM) som stödmedium. CAM är ett slags skumplastefilm med bra enhetlig, och tjockleken är 0,1 mm-1,5 mm, vilket har en viss vattenabsorption.
Material, instrument och reagens för CAM-elektrofores
Exempel:friskt humant blodserum
Instrument:strömförsörjning DYY-6C, elektroforestank DYCP-38C, överlägsen provladdning WD-9404
Reagenserna
1) cellulosaacetatmembran 7X9cm
2) PH 8,6 barbitolbuffertlösning (jonstyrka 0,05-0,09, det är 0,06 tid.): ta 1,84 g dietylbarbitursyra och ta sedan 1,03 g dietylnatriumpentobarbital, tillsätt lite destillerat vatten för att värmas upp för att lösas upp och gör upp till 1000ml;
3) Fläck: Ponceau S 0,2 g, triklorättiksyra 3 g, tillsätt 100 ml destillerat vatten;
4) TBS/T eller PBS/T: 45 ml 95 % etanol, 5 ml isättika, tillsätt 50 ml destillerat vatten;
5) Rengöringslösning: 70 ml vattenfri etanol, 30 ml isättika.
Experiment Method
1) Förbered membranet: Sänk ned membranet i barbitolbuffertlösningen 30 min-8 timmar och ta ut det, ta bort den extra lösningen med absorberande papper.
2) Ladda prover: Skilj den grova sidan och den släta sidan av membranet och markera en linje på 1,5 cm avstånd till den övre änden på den grova sidan. Ladda prover med överlägset provladdningsverktyg på den grova sidan. Obs: Proverna ska laddas på den grova sidan av membranet. Efter att serumproverna är helt genomträngda i membranet, vänd på membranet, lägg den grova sidan (med prover) nedåt mot tanken och änden med prover placeras i negativ elektrod.
3) Elektrofores: Slå på strömförsörjningen, 0,4～0,6m A/cm membran, körtiden är 30-45 min. Efter att ha kört elektrofores, stäng av strömmen.
4) Färga och rengöra: Ta ut membranet från tanken och doppa nedit i färglösningen i 5 minuter och rengör den sedan i rengöringslösningen om och om igen i 3-4 gånger tills bakgrundsfärgen är klar. Serumproteinerna ska visas på banden, och normalt finns det fem zoner, som bildar övre änden av den markerade linjen, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Konservering: lägg den torra elektroforesenbandi rengöringslösning i 10-15 minuter, och ta sedan ut den och fäst den på ett rent glas, efter att det torkat blir det en genomskinlig filmband.
ExperimenteraResultat
Separationseffekten av serumprover är god, och det finns inget bandsvansfenomen. Repeterbarheten av resultaten varierar beroende på testprocedurerna och försöksledarens metoder, och repeterbarheten är hög.
Slutsats
Det snabba kliniska elektroforesdetektionssystemet (Elektrofores tankDYCP-38C,strömförsörjningDYY-6C och överlägsen provladdning WD-9404) tillverkad av vårföretaget Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltduppfyller de experimentella kraven,ochresultaten är reproducerbara, enkla och snabba, lämpliga förundervisningforskning.
Peking LiuyiBiotechnology Co., Ltd är specialiserat på att tillverka elektroforesprodukter för life science-industrin, somhar mer än 50-årig historia i Kina och företaget kan tillhandahålla stabila och högkvalitativa produkter över hela världen. Genom år av utveckling är det värt ditt val!
Vi söker nu partners, både OEM elektroforestank och distributörer är välkomna.
För mer information om oss, vänligen kontakta oss via e-post[e-postskyddad]eller[e-postskyddad].
Posttid: 2022-nov-14