Comet Assay: En känslig teknik för att upptäcka DNA-skador och reparation

Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) är en känslig och snabb teknik som främst används för att upptäcka DNA-skador och reparation i enskilda celler. Namnet "Comet Assay" kommer från den karakteristiska kometliknande formen som visas i resultaten: cellkärnan bildar "huvudet", medan de skadade DNA-fragmenten migrerar och skapar en "svans" som liknar en komet.

Princip

Principen för Comet Assay är baserad på migrering av DNA-fragment i ett elektriskt fält. Intakt DNA förblir i cellkärnan, medan skadat eller fragmenterat DNA migrerar mot anoden och bildar kometens "svans". Svansens längd och intensitet är direkt proportionell mot omfattningen av DNA-skadan.

Förfarande

1. Cellförberedelse: Celler som ska testas blandas med lågsmältande agaros och sprids på objektglas för att bilda ett enhetligt lager.
2. Celllys: Objektglasen nedsänks i en lyslösning för att avlägsna cellmembranet och kärnmembranet, vilket exponerar DNA:t.
3. Elektrofores: Objektglasen placeras i en elektroforeskammare under alkaliska eller neutrala förhållanden. Skadade DNA-fragment migrerar mot den positiva elektroden under påverkan av det elektriska fältet.
4. Färgning: Efter elektrofores färgas objektglasen med ett fluorescerande färgämne (t.ex. etidiumbromid) för att visualisera DNA:t.
5. Mikroskopisk analys: Med hjälp av ett fluorescensmikroskop eller specialiserad programvara analyseras kometformerna och parametrar som svanslängd och intensitet mäts.

Bild från biorender

Dataanalys

Resultat från Comet Assay utvärderas baserat på flera nyckelparametrar:

• Svanslängd: Representerar avståndet som DNA:t migrerar, vilket indikerar omfattningen av DNA-skadan.
• Svans DNA-innehåll: Procentandelen av DNA som migrerar in i svansen, används ofta som ett kvantitativt mått på DNA-skada.
• Olive Tail Moment (OTM): Kombinerar både svanslängd och svans-DNA-innehåll för att ge ett mer omfattande mått på DNA-skada.

Ansökningar

1. Genotoxicitetsstudier: Comet Assay används i stor utsträckning för att bedöma effekterna av kemikalier, läkemedel och strålning på cell-DNA, vilket gör den till ett nyckelverktyg för genotoxicitetstester.
2. Miljötoxikologi: Det hjälper till att analysera miljöföroreningars inverkan på organismers DNA, vilket ger insikter om ekosystemsäkerhet.
3. Medicinsk och klinisk forskning: Comet Assay används för att studera DNA-reparationsmekanismer, cancer och andra DNA-relaterade sjukdomar. Den utvärderar också effekten av cancerterapier som strålbehandling och kemoterapi på DNA.
4. Livsmedels- och jordbruksvetenskap: Används för att bedöma säkerheten för bekämpningsmedel, livsmedelstillsatser och andra ämnen, och för att studera deras toxiska effekter i djurmodeller.

Fördelar

• Hög känslighet: Kan upptäcka låga nivåer av DNA-skador.
• Enkel operation: Tekniken är enkel, vilket gör den lämplig för screening med hög genomströmning.
• Bred applikation: Den kan appliceras på olika celltyper, inklusive djur- och växtceller.
• Kvantifieringsutmaningar: Samtidigt som den tillhandahåller kvalitativa data om DNA-skador, är kvantitativ analys mycket beroende av programvara och bildanalystekniker.
• Experimentella förhållanden: Resultaten kan påverkas av faktorer som elektroforestid och pH, ​​vilket kräver noggrann kontroll av experimentella förhållanden.

Begränsningar

Comet Assay är ett ovärderligt verktyg inom biomedicinsk forskning, miljövetenskap och läkemedelsutveckling på grund av dess flexibilitet och höga känslighet för att upptäcka DNA-skador och reparationer. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)erbjuder horisontell elektroforeskammare för kometanalys. Välkommen att kontakta oss för att diskutera omComet Assayprotokoll.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiserat sig på tillverkning av elektroforesinstrument i mer än 50 år med vårt eget professionella tekniska team och FoU-center. Vi har en pålitlig och komplett produktionslinje från design till besiktning och lager, samt marknadsföringsstöd. Våra huvudprodukter är elektroforescell (tank/kammare), elektrofores strömförsörjning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbild- och analyssystem etc. Vi levererar även labbinstrument som PCR-instrument, virvelblandare och centrifug för laboratoriet.

Om du har någon inköpsplan för våra produkter, tveka inte att kontakta oss. Du kan skicka ett meddelande till oss på e-post[e-postskyddad]eller[e-postskyddad], eller ring oss på +86 15810650221 eller lägg till Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.

Skanna QR-koden för att lägga till på Whatsapp eller WeChat.