Provberedning ochBelastning
På grund av användningen av ett kontinuerligt buffertsystem utan staplingsgel i de flesta fall bör proverna ha en lämplig koncentration och en liten volym. Använd apipettatt långsamt tillsätta provet, med 5-10 μg per brunn, för att undvika en signifikant minskning av upplösningen. Närladda prov, strömförsörjningen måste vara avstängd. Provet bör innehålla ett indikatorfärgämne (0,025 % bromfenolblått eller orange) och sackaros (10-15 %) eller glycerol (5-10 %) för att öka dess densitet, koncentrera provet och förhindra diffusion. Men ibland kan sackaros eller glycerol orsaka U-formade band i elektroforesresultat, vilket kan undvikas genom att använda 2,5 % Ficoll (polyvinylpyrrolidon).
Elektrofores
Spänningen för elektrofores är 5-15 V/cm, vanligtvis runt 10 V/cm. För separation av stora molekyler bör spänningen vara lägre, vanligtvis inte överstiga 5 V/cm.
Färgning
Fluorescerande färgämne etidiumbromid (EB) används vanligtvis för färgning för att observera DNA-band i agarosgel. EB kan sätta in mellan baspar av DNA-molekyler, vilket gör att EB binder med DNA. Absorptionen av 260 nm ultraviolett ljus av DNA överförs till EB, och det bundna EB avger fluorescens vid 590 nm i det rödorange området av det synliga ljusspektrumet. Färgning av gelén i en 1 mmol/L MgSO4-lösning i 1 timme kan minska bakgrundsfluorescens orsakad av obundet EB, vilket underlättar detektionen av små mängder DNA.
EB-färgämne har flera fördelar: det är lätt att använda, bryter inte nukleinsyror, har hög känslighet och kan färga både DNA och RNA. EB kan tillsättas till provet och spåras med UV-absorption när som helst. Efter färgning kan EB avlägsnas genom extraktion med n-butanol.
Emellertid är EB-färgämne en potent mutagen, och försiktighetsåtgärder, såsom att bära polyetenhandskar, bör vidtas under hanteringen. Akridin orange är också ett vanligt använda färgämne eftersom det kan skilja mellan enkelsträngade och dubbelsträngade nukleinsyror (DNA, RNA). Den uppvisar grön fluorescens (530 nm) för dubbelsträngade nukleinsyror och röd fluorescens (640 nm) för enkelsträngade nukleinsyror. Dessutom kan andra färgämnen såsom metylenblått, metylengrönt och kinolin B användas för färgning.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiserat sig på tillverkning av elektroforesinstrument i mer än 50 år med vårt eget professionella tekniska team och FoU-center. Vi har en pålitlig och komplett produktionslinje från design till besiktning och lager, samt marknadsföringsstöd. Våra huvudprodukter är elektroforescell (tank/kammare), elektroforesströmförsörjning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbild- och analyssystem etc.
Vi söker nu partners, både OEM elektroforestank och distributörer är välkomna.
Om du har någon inköpsplan för våra produkter, tveka inte att kontakta oss. Du kan skicka ett meddelande till oss på e-post[e-postskyddad]eller[e-postskyddad], eller ring oss på +86 15810650221 eller lägg till Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Skanna QR-koden för att lägga till på Whatsapp eller WeChat.
Posttid: 2023-12-20