1. Klassificering
Gelelektrofores är indelad i vertikala typer (inklusive kolonngeler och plattgeler) och horisontella typer (huvudsakligen plattgeler) (Figur 6-18). Generellt är vertikal separation något överlägsen horisontell, men horisontell gelberedning har åtminstone fyra fördelar: det finns stöd under hela gelén, vilket tillåter användning av lågkoncentration agaros; det är möjligt att förbereda agarosgelplattor med olika specifikationer; gelberedning och provladdning är bekvämare; elektroforeskammaren är enkel att konstruera och kostnadseffektiv. Eftersom horisontell elektrofores utförs med agarosgelplattan helt nedsänkt cirka 1 mm under ytan av elektroforesbufferten, kallas det även nedsänkt elektrofores.
Elektroforestank DYCP-31DN för agarosgelelektrofores
2. Buffertsystem
Vid nukleinsyraseparation använder de flesta system kontinuerliga system. Vanligt använda elektroforesbuffertar inkluderar TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L borsyra, 0,0024mol/L EDTA) buffert och THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L natriumacetat, 0,0018 mol/L EDTA) buffert. Dessa buffertar framställs i allmänhet som 10x stamlösningar och späds till önskad koncentration när de används. Migrationshastigheterna för linjärt och cirkulärt DNA i agarosgel varierar med bufferten som används. I THE buffert är migrationshastigheten för linjärt DNA större än för cirkulärt DNA, medan i TBE-buffert är det motsatta.
3. Beredning av agarosgel
(1) Framställning av horisontell agarosgel
(a) Förbered den erforderliga koncentrationen av agarosgel med 1x elektroforesbuffert.
(b) Värm agarosen till fullständig upplösning antingen i ett kokande vattenbad, på en magnetomrörare eller i en mikrovågsugn. Kyl agaroslösningen till 55 °C och tillsätt etidiumbromid (EB) färgämne till en slutlig koncentration av 0,5 μg/ml.
(c) Försegla kanterna på glas- eller akrylplattor med en liten mängd agarosgel, lägg till en kam och placera kamtänderna cirka 0,5~1,0 mm ovanför plattan.
(d) Häll den smälta agarosgellösningen kontinuerligt i glas- eller akrylplattans form (tjockleken beror på volymen av DNA-provet), undvik införandet av luftbubblor. Låt den stelna naturligt i rumstemperatur.
(e) Ta försiktigt bort kammen efter fullständig stelning. Tillsätt en lämplig mängd elektroforesbuffert till geltanken och se till att gelplattan är nedsänkt cirka 1 mm under elektroforesbuffertens yta.
(2) Framställning av vertikal agarosgel
(a) Ta bort fett eller rester från glasplattor genom att tvätta dem med etanol.
(b) Placera distansplattor mellan främre och bakre fördämningar, rikta in kanterna på distansplattorna med de främre och bakre fördämningarna och fäst dem med klämmor.
(c) Tillsätt 2% agaros i 1x buffert mellan kanterna på distansplattorna för att bilda en 1 cm hög agarosplugg i botten av gelgjutningskammaren.
(d) Häll den smälta agarosgelen i önskad koncentration, framställd i 1x buffert, i gelkammaren upp till 1 cm under toppen.
(e) Sätt in kammen, undvik att fånga luftbubblor under kammens tänder. Ibland kan det uppstå rynkor vid kamtänderna under kylning av agarosgel; i sådana fall, tillsätt helt enkelt lite smält agaros överst för att stelna den.
(f) Ta bort kammen. För att förhindra buffertläckage i laddningsöppningen, försegla anslutningen mellan agarosgelplattan och elektroforeskammaren med 2 % agaros och tillsätt den nödvändiga mängden buffert.
(g) Tillsätt 1x elektroforesbuffert till gelkammaren.
(h) Ladda försiktigt DNA-prover på agarosgelen under bufferten.
Mer information om den grundläggande kunskapen om agarosgelelektrofores kommer vi att dela med oss av nästa vecka. Önskar att denna information var till hjälp för ditt experiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har specialiserat sig på tillverkning av elektroforesinstrument i mer än 50 år med vårt eget professionella tekniska team och FoU-center. Vi har en pålitlig och komplett produktionslinje från design till besiktning och lager, samt marknadsföringsstöd. Våra huvudprodukter är elektroforescell (tank/kammare), elektroforesströmförsörjning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbild- och analyssystem etc.
Vi söker nu partners, både OEM elektroforestank och distributörer är välkomna.
Om du har någon inköpsplan för våra produkter, tveka inte att kontakta oss. Du kan skicka ett meddelande till oss på e-post[e-postskyddad]eller[e-postskyddad], eller ring oss på +86 15810650221 eller lägg till Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Skanna QR-koden för att lägga till på Whatsapp eller WeChat.
Posttid: Dec-07-2023